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本试剂盒是简便的λ噬菌体基因组DNA的试剂盒，其提取原理是通过PEG沉淀、酚异戊醇等提取，残留碎片通过沉淀离心去除，通过一系列快速的漂洗、离心步骤，将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除，即可获得λ噬菌体基因组DNA，可进行酶切、PCR等下游实验。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

λ噬菌体是最早使用的克隆载体，其基因组是长度约为50kb的双链DNA分子，其在宿主细胞由两种生活途径，一是裂解生长：环状DNA分子在细胞内多次复制，合成大量噬菌体基因产物，装配成噬菌体颗粒，裂解宿主菌再进行下一次感染；二是溶源性生长：感染细胞内λ噬菌体DNA整合到宿主菌染色体DNA中与之一起复制，并遗传给子代细胞，宿主细胞不裂解。科研人员常常利用λ噬菌体裂解生长的特点，培养获取大量的λ噬菌体颗粒，并提取λ噬菌体DNA。噬菌体载体广泛用于文库筛选，目的克隆培养获得大量的噬菌体颗粒需要提取λ噬菌体DNA来开展测序等后续工作，λ噬菌体裂解培养物离心后的上清，首先用RNase A/DNase I混合酶消化去除残留的宿主菌DNA/RNA，沉淀收集噬菌体，通过酚异戊醇等提取，残留碎片通过沉淀离心去除，通过一系列快速的漂洗、离心的步骤，将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除，获得DNA的量很高，但是纯度一般，但是足够用于大多数分子生物学实验。

组分	规格	保存
试剂(A):RNase A	10mg	-20℃
试剂(B):DNase I	10mg	-20℃
试剂(C):噬菌体沉淀液	200mL	4℃
试剂(D):SM Buffer	50mL	4℃
试剂(E):噬菌体裂解液	2mL	RT
试剂(F):蛋白清除液	100mL	4℃，避光
试剂(G):噬菌体漂洗液	100mL	RT
试剂(H):TE Buffer	5mL	RT

保存：收到后按标签温度分开保存，有效期6个月。

• 离心管
  
• 低温离心机、摇床
  
• 70%乙醇、氯仿

• 用于裂解的噬菌体、宿主菌越新鲜，裂解越好、收获量越大。
  
• 液体培养裂解时，到了时间裂解还没发生，可适当的提高温度或加大振摇速度。
  
• RNase/DNase消化过度，可能减少产量；消化不完全，可粘走部分噬菌体。
  
• 噬菌体裂解液在低温下易结晶析出白色物质，可37℃温浴至完全溶解。

以下操作以10mL噬菌体感染细菌培养上清液为例，仅供参考。

• 准备工作：向RNase A和DNase I分别加入1mL的TE Buffer吹打，颠倒混匀，充分溶解RNase A和DNase I后，按照每次使用量分装－20℃冻存，6个月有效。
  
• 将0.1～0.5%氯仿处理后的λ噬菌体感染的12mL液体培养液转移至离心管，8000～10000g离心10min，去除细菌碎片，取上清液。一般建议8000g离心，如果效果不佳可以考虑10000g，但转速过高容易导致噬菌体也沉淀至管底，降低产量。
  
• 取10mL上清液，加入5μL RNase A和10μL DNase I，充分混匀，37℃培养30min。
  注意：噬菌体培养上清液会因生长和裂解情况不同致使残留的RNA/DNA量不液不同，RNase/DNase消化过度，可能减少产量；消化不完全，DNA、RNA可粘走部分噬菌体，一般RNase可以进行调整，可根据实际情况适当调节用量和消化时间。
  
• 向上清液中加入4mL噬菌体沉淀液，摇匀至溶解，冰浴1h或4℃过夜。
  
• 4℃ 10000g离心20min，弃上清液。
  
• 加入1mL SM Buffer充分清洗管壁及沉淀，转移至新的离心管或微量离心管，加入40μL噬菌体裂解液，68℃培养15min。
  
• 加入等体积蛋白清除液，轻轻混匀，12000g离心5min，取上清液。
  
• 可选步骤：转移上清液至新的离心管中，加入等体积预冷的噬菌漂洗液，轻轻混匀，-20℃孵育1h，4℃ 12000g离心10min，弃上清液。
  
• 加入适量的70%乙醇溶液，混匀，4℃ 8000g离心8min，弃上清液；如果有必要，可以重复1次该清洗步骤。
  
• 室温自然干燥DNA，加入适量TE Buffer，-20℃保存；TE buffer体积越大，DNA浓度越低。

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